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光柵型全波長酶標(biāo)儀又稱微孔板分光光度計、全波長讀板機,以光柵為分光元件、以微孔板為樣品載具的生化識讀設(shè)備,主要用于科研領(lǐng)域。光柵型全波長酶標(biāo)儀與傳統(tǒng)的濾光片型酶標(biāo)儀相比,具有如下優(yōu)勢:
多功能酶標(biāo)儀的分類方法眾多,一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類??傮w來說,濾片技術(shù)由于發(fā)展已久,配合二向色鏡(其實也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路系統(tǒng),可以滿足大部分實驗的需要,是日常檢驗的主流。
但是濾光片型儀器由于受限于濾片的波長和數(shù)量限制,不可能滿足日益增加的實驗類型的檢測需要,而且有時需要對物質(zhì)的吸收、激發(fā)和發(fā)射光譜進(jìn)行研究,所以后來就誕生了光柵型的儀器。最先推出光柵型多功能酶標(biāo)儀是MD公司。
光柵型酶標(biāo)儀的推陳出新,使得用戶在波長選擇上不再受限,如上海閃譜生物科技公司的SP-Max 2300A光柵型全波長酶標(biāo)儀,光譜范圍可達(dá)190nm-1000nm,波長任意可調(diào),而且在雜光率、帶寬控制等性能上還超越了濾光片系統(tǒng)。有的還可實現(xiàn)實現(xiàn)了帶寬連續(xù)可調(diào),如SP-Max 3500型多功能全波長熒光酶標(biāo)儀。這些都是目前濾光片型酶標(biāo)儀所不能或者較難實現(xiàn)的。目前,光柵型全波長酶標(biāo)儀已經(jīng)成為了科研主流。
光柵型濾光系統(tǒng)儼然已經(jīng)成為了目前通用性多功能酶標(biāo)儀的主流,多家廠家共同努力,已經(jīng)把光柵技術(shù)推到了歷史新高。在光柵的眾多技術(shù)參數(shù)之中,最關(guān)鍵的無疑就是光柵的雜光率和波長選擇的準(zhǔn)確性了。
雜光率指得就是光源通過光柵后,得到的光線中,“不需要"的波長的光占所標(biāo)稱波長的光的比例,表征了濾光的純度。由于光線干涉、衍射等的復(fù)雜性,無論使用濾光片還是光柵,雜光都是不可避免的。各種濾光技術(shù)的本質(zhì)就是要想辦法把雜光盡可能地去掉。一般來說,濾光片型的雜光率在10-4~10-5之間,光柵型的可以做到10-6~10-7。由于此類雜光是非特異的,而且會直接進(jìn)入最后的檢測器,所以有多少的雜光就會引入多少的隨機誤差。在熒光等檢測過程中,由于檢測器存在放大效應(yīng),雜光率的干擾也會被指數(shù)級放大。因此,雜光率就是一個濾光系統(tǒng)的首要性能指標(biāo)。
光柵的另一個重要指標(biāo)就是波長選擇的準(zhǔn)確性。因為很多檢測是依賴于物質(zhì)在某個波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定,實際檢測波長偏離260nm幾個nm以上的話,OD值與最終濃度之間的數(shù)學(xué)關(guān)系就會發(fā)生改變。因此,一組性能優(yōu)良的光柵系統(tǒng),他的波長選擇準(zhǔn)確性應(yīng)該是在±0.5~1nm之間。波長偏離過大有時就會影響到最終結(jié)果的準(zhǔn)確性,而上海閃譜生物科技公司的SP-Max 3500型、SP-Max 2300A光柵型全波長掃描儀的波長選擇準(zhǔn)確性可達(dá)±0.2nm。
這兩個參數(shù)可謂是光柵甚至濾光片濾光系統(tǒng)最關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù),直接影響到的是得到數(shù)據(jù)是否是真正所要測量的結(jié)果,是實驗結(jié)果可靠性的最基本要求。
在保證檢測可靠的基礎(chǔ)上,不同儀器的下一個差異就體現(xiàn)在檢測的靈敏度上面,這時人們關(guān)心的就是儀器能夠檢測到多弱的信號。
靈敏度涉及了整個光路系統(tǒng)的設(shè)計和選料,很難說某一個部件會起決定性作用。但是有一點,在各種單功能檢測項目中,光吸收檢測用非放大型的光電二極管、熒光檢測用光電倍增管、發(fā)光檢測用專門設(shè)計的單光子計數(shù)光電倍增管,這三種不同的檢測器是各自檢測領(lǐng)域的優(yōu)先選擇。
各單項檢測的結(jié)果都是用相應(yīng)檢測器完成的。當(dāng)然也有的儀器出于成本等考慮,用一個檢測器兼容多種檢測模式,這在一定程度上也能完成實驗需求,但是在性能上也會有所犧牲折中,無法實現(xiàn)各項檢測都達(dá)到。
這說明了光柵型酶標(biāo)儀的研發(fā)又進(jìn)入了一個新的高度,除了在靈活性上取得了的作用外,還在檢測靈敏度等方面也逐漸替代傳統(tǒng)的濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型是科研領(lǐng)域多功能酶標(biāo)儀的未來主要發(fā)展趨勢;而濾光片型儀器也正在往單項性能更優(yōu)的方面改進(jìn)。
除了常規(guī)的6~384/1536孔酶標(biāo)板檢測之外,有些儀器還附帶了比色杯、微量檢測板等的兼容功能。無論是使用立式比色杯、臥式比色杯還是各種微量檢測板,其目的都是給光程不固定的酶標(biāo)板檢測引入一個標(biāo)準(zhǔn)光程的概念。雖然酶標(biāo)板檢測也能通過光程校正等方式實現(xiàn)10mm光程OD值的換算,但這只是一個數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換過程,檢測誤差累積較多,實際使用效果不佳。引入比色杯和微量檢測板后,光吸收的檢測光程就被固定在10mm或者0.5mm等的標(biāo)準(zhǔn)長度,OD值換算更加簡單和準(zhǔn)確。附帶了此類檢測功能的酶標(biāo)儀,相當(dāng)于除了本身的多功能酶標(biāo)檢測之外,還能替代紫外可見分光光度計的功能,使其功能更加全面,儀器的性價比更高。